糖尿病小鼠造模(糖尿病小鼠造模后血糖升高又下降)

• 1、小鼠动物造模实验步骤！
• 2、有氧运动可改善糖尿病肾病模型小鼠肾脏的氧化应激损伤
• 3、人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞不同途径移植治疗1型糖尿病鼠

小鼠动物造模实验步骤！

以下是小鼠动物造模实验的通用步骤框架，具体细节需根据研究目的（如疾病模型、基因编辑、药效评价等）调整。以常见的疾病模型（如糖尿病、肿瘤、神经退行性疾病）为例：

1. 伦理审查与实验许可
2. 通过机构动物伦理委员会（IACUC）审批，遵守“3R原则”（减少、替代、优化）。
3. 小鼠选择
4. 品系：根据模型需求选择（如C57BL/6常用，裸鼠用于肿瘤移植）。
5. 年龄/性别：明确年龄（如8周龄）、性别（雌雄分设对照组）。
6. 饲养条件：SPF级环境，12小时光暗周期，自由饮食/水。
7. 材料与试剂
8. 造模试剂（如STZ诱导糖尿病）、手术器械、麻醉剂（异氟烷/戊巴比妥钠）、消毒用品等。

• 步骤：
• 空腹小鼠（4-6小时）。
• 腹腔注射STZ（50-100 mg/kg，连续5天）。
• 72小时后测血糖＞16.7 mmol/L为造模成功。

• 步骤：
• 培养肿瘤细胞（如Hepa1-6）。
• 小鼠腋下/背部皮下注射细胞悬液（1×10^6 cells/只）。
• 定期测量瘤体积（公式：V = 0.5×长×宽²）。

• 步骤：
• 麻醉后气管插管，连接呼吸机。
• 开胸结扎左冠状动脉前降支（30分钟缺血，再灌注24小时）。

• 步骤：
• 设计gRNA和Cas9载体。
• 显微注射至受精卵，移植到假孕母鼠。
• 鉴定子代基因型（PCR/Western blot）。

1. 表型检测
2. 生理指标：体重、血糖、血压等。
3. 影像学：MRI、超声（如心功能）、活体成像（肿瘤）。
4. 分子生物学
5. qPCR/WB检测目标基因/蛋白。
6. 组织病理学（HE染色、免疫组化）。

• 统计方法：t检验、ANOVA等，使用GraphPad Prism。
• 记录要求：详细记录造模时间、剂量、异常反应等。

1. 对照组设置：空白对照、假手术对照（如注射生理盐水）。
2. 人道终点：提前设定终止标准（如肿瘤直径＞1.5 cm）。
3. 样本量：根据预实验Power分析确定（通常n≥6/组）。

• 造模失败：检查试剂活性（如STZ需现配）、操作规范（如无菌条件）。
• 高死亡率：优化麻醉剂量、术后护理（如保暖、抗生素）。

根据具体模型（如阿尔茨海默病、关节炎、 sepsis等），需调整诱导方法、时间点和评价指标。建议参考经典文献（如《Nature Protocols》）或实验室已有方案。

有氧运动可改善糖尿病肾病模型小鼠肾脏的氧化应激损伤

摘要：

核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2，Nrf2)：属于转录因子亮氨酸拉链转录激活因子(CNC)家族成员，为细胞防御多种应激损伤的关键因子。Nrf 2 是诱导Ⅱ相酶基因表达的必需调节因子。

有氧运动：是指人体在氧气充分供应的情况下进行的耐久性运动，其特点是强度低、时间长、不中断、有节奏，能够改善胰岛素抵抗、降低血糖，对糖尿病具有一定的疗效。

背景：研究证实，长期有规律的有氧运动能够有效降低血糖，改善胰岛素抵抗，是治疗糖尿病肾病的重要措施，但有关其具体机制不明。

目的：探讨有氧运动对糖尿病肾病小鼠肾脏氧化应激损伤的影响及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)信号通路的关系。

方法：雄性C57/BL6小鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病组及有氧运动治疗组，每组8只。除正常对照组外，其他2组小鼠均采用多次小剂量腹腔注射链脲佐菌素(40 mg/kg，连续注射5 d)建立糖尿病小鼠模型(4周后24 h尿蛋白含量>30 mg提示糖尿病肾病造模成功)。糖尿病小鼠造模成功8周后，有氧运动治疗组小鼠进行为期8周的跑台有氧运动，1 h/d，5 d/周。治疗8周后，测量尾动脉收缩压、24 h尿微量白蛋白排泄率、血糖、血脂及血肌酐、血尿素氮水平；取肾脏组织匀浆，测定丙二醛水平及总超氧化物歧化酶活性；观察肾脏组织肾小球系膜区细胞外基质积聚情况，并检测肾脏组织活性氧水平及核因子E2相关因子2核蛋白和血红素氧合酶1蛋白表达。实验方案经河南省中医药研究院动物实验伦理委员会批准(批准号为HPHT2015019)。

结果与结论：①与正常对照组比较，糖尿病肾病组小鼠24 h尿微量白蛋白排泄率、血糖、血肌酐、尿素氮、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白-胆固醇以及尾动脉收缩压等指标水平显著增加，肾脏肾小球系膜区细胞外基质显著积聚，活性氧水平和丙二醛水平显著增加；与糖尿病肾病组比较，有氧运动治疗组上述各项指标显著降低；②与糖尿病肾病组比较，有氧运动治疗组小鼠总超氧化物歧化酶活性增强，肾小球系膜区细胞外基质积聚显著减少，肾脏组织细胞核蛋白核因子E2相关因子2和总蛋白血红素氧合酶1的表达上调；③结果说明，有氧运动能够降低糖尿病肾病小鼠肾脏氧化应激损伤，可能与Nrf2/HO-1通路激活有关。

ORCID: 0000-0003-1328-3575(刘晓晨)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 有氧运动, 糖尿病肾病, 氧化应激, Nrf2/HO-1信号通路

文章来源:刘晓晨, 王改凤, 张社峰. 有氧运动可改善糖尿病肾病模型小鼠肾脏的氧化应激损伤[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(17): 2712-2717.

人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞不同途径移植治疗1型糖尿病鼠

人脐带间充质干细胞分化为胰岛样细胞：人脐带间充质干细胞具有多向分化潜能，可分化为骨细胞、脂肪细胞、胰岛细胞等，在相关因子作用下，可使其分化为分泌胰岛素的细胞，称为胰岛样细胞。

葡萄糖耐量：检测胰岛样细胞移植后糖尿病鼠是否可以更好地响应外周血糖浓度变化，释放胰岛素，降低血糖。

背景：人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞移植于1型糖尿病鼠体内，会使血糖降低，糖尿病症状有所改善，但腹腔移植的方式少有报道。

目的：观察不同途径移植人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞对于1型糖尿病小鼠的治疗效果。

方法：选采用组织块贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞，然后将其定向分化为胰岛样细胞。从15只雄性C57BL/6J小鼠中随机取3只小鼠做正常组，其余12只小鼠腹腔注射链脲佐菌素制备1型糖尿病模型。造模成功9只小鼠随机分为糖尿病组、尾静脉-胰岛样细胞组、腹腔-胰岛样细胞组，每组3只。造模10 d后，正常组和糖尿病组不予处理，尾静脉-胰岛样细胞组经尾静脉注射0.4 mL胰岛样细胞悬液(含5×105个细胞)，腹腔-胰岛样细胞组经腹腔注射0.4 mL胰岛样细胞悬液(含5×105个细胞)。移植后每周检测2次血糖，移植后28 d进行葡萄糖耐量实验，移植后42 d检测胰岛素水平。

结果与结论：①与糖尿组相比，尾静脉-胰岛样细胞组在移植后第10天开始血糖明显下降，一直维持到31 d，胰岛素水平升高，葡萄糖耐量改善，差异有显著性意义(P < 0.05)；腹腔-胰岛样细胞组血糖、胰岛素水平、葡萄糖耐量未见明显改善；②结果提示，应用人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞治疗1型糖尿病鼠，尾静脉注射是一种比较理想的移植方式，腹腔注射的效果不佳。

https://orcid.org/0000-0001-7907-0316(郭璇)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词：人脐带间充质干细胞, 1型糖尿病, 胰岛样细胞, 腹腔, 静脉, 移植, 鼠, 实验

文章来源：郭 璇, 解 军, 索金荣, 李英蕊, 黄 磊, 马牧南, 李静静, 傅松涛. 人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞不同途径移植治疗1型糖尿病鼠[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(1): 78-83.

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